膜片钳电生理检测ACSF和电极内液配制

大鼠皮质细胞膜电位：皮质文化都沐浴在一种生理盐溶液(Na, 151 mM, K, 3 m m, C1, 154 m, 锥体神经元树突动作电位：急性剥离大脑保存在ACSF（mM）：125NaCl, 25NaHCO3, 3 KCl, 1.25 NaH2PO4, 25 glucose, 0.5 CaCl2, and 6 MgCl2, pH 7.4 (95% O2/5%CO2)。记录槽中MgCl2为 1 mM（其他不变）。
用硼硅酸盐玻璃管进行体细胞和树突状细胞附着记录电极内液：120 KCl, 20 tetraethylammonium-Cl, 10 HEPES, 5 EGTA,54-AP, 1MgCl2, 1 or 3BaCl2, 1NiCl2, 0.5CdCl2, and 0.001TTX, pH 7.4 (285 mOsm)
MNTB神经元树突：ACSF; in mm: NaCl, 130; KCl, 3; MgCl2, 5; CaCl2, 1; NaH2PO4, 1.25; NaHCO3, 26.2; glucose, 10; constantly bubbled with 95% O2 and 5% CO2
电极内液：in mm: CsCl, 120; NaCl, 4; MgCl2, 4; CaCl2, 0.001; HEPES, 10; Mg-ATP, 3; GTP-Tris, 0.3; EGTA, 10) or K-gluconate-based internal solution (in mm: KCl, 17.5; K-gluconate, 122.5; NaCl, 9; MgCl2, 1; Mg-ATP, 3; GTP-Tris, 0.3; HEPES, 1; EGTA, 0.2。PH7.2
体外培养哺乳动物丘脑神经元的电生理学

利用钙成像和电生理学对人神经元和星形胶质细胞进行体外功能表征

1. Artificial cerebrospinal fluid (ACSF): 119 mM NaCl, 26 mM NaHCO3, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 1.3 mM MgSO4, and 11 mM glucose are dissolved in Milli-Q and bubbled with carbogen for 15 min before adding 2.5 mM CaCl2. pH ~7.4 and osmolarity ~307 mOsm. Keep at room temperature (RT).
2. Potassium gluconate-based intracellular solution (KGlu intra): 122.5 mM KGlu, 12.5 mM KCl, 10 mM HEPES, 2 mM Na2ATP, 0.3 mM Na2GTP, 2 mM MgCl2, and 8.0 mM NaCl. Adjust pH to 7.3 with KOH. Osmolarity ~300 mOsm. Dissolve 1–3 mg/mL biocytin (epsilon-biotinoyl-L-lysine, Mw ¼ 372.48 g/mol, Biotium) in the pipette solution prior recording.
3. Cesium chloride-based intracellular solution (CsCl intra): 135 mM CsCl, 10 mM NaCl, 10 mM HEPES, 2 mM Na2ATP, 0.3 mM Na2GTP, and 2 mM MgCl2. Adjust pH to 7.3 with CsOH. Osmolarity ~290 mOsm. Dissolve 1–3 mg/ mL biocytin (epsilon-biotinoyl-L-lysine, Mw¼372.48 g/mol, Biotium) and 1.72 mg/mL QX314 bromide (N-Ethyllidocaine bromide, Mw ¼ 343.31 g/mol, Abcam Biochemicals) in the pipette solution prior recording.
   电生理：
4. 将带有感兴趣细胞的coverslip转移到膜片钳设置中，并在+34℃下连续灌注ACSF (1-2 mL/min)；
5. 进行全细胞膜片钳记录。使用电阻为3-7 MQ的Patch pip进行修补。除非另有说明，贴片管内充满葡萄糖细胞内溶液。细胞内溶液中含有1-3毫克/毫升的生物细胞素，用于细胞的事后鉴定。接近细胞并在打开细胞前获得一个gigaseal；
   3.获得细胞的内部后,该系列电阻(Rscrics)和输入电阻(Rinput)确定电压钳通过50-ms-long 5或-10 mV测试脉冲从持有的潜力- 70 mV(见注8)。协议与我年代间隔重复10次；
6. 在不注入电流0.5-1分钟的情况下，在电流钳位模式下测定静息膜电位；
   神经元特性：1.为了确定神经元激发动作电位(APs)和生成电流电压图的能力，使细胞处于电流钳位模式，并通过注入电流将膜电位调整到70 mvv左右。通过电流注入诱导aps, 10 pA从0到390 pA，持续500 ms，间隔为
   神经元和星形胶质细胞的功能特征832. 为了确定AP特性，保持细胞处于当前钳位模式，并调整膜电位注入电流- 70mv(见注9)。通过电流斜坡诱导APs，持续I s，从0到300pa或从0到500pa。使用当前渐变期间生成的第一个AP来确定AP特性。3.钠和钾电流的存在是在电压箝位模式下确定的。细胞保持在-70 mV。电压步长10 mV，范围从m-70 mV到+40 mV，持续200 ms，间隔2 s。4. 用含有I M TTX的ACSF灌注细胞。重复步骤2和步骤3，显示APs和钠电流被TTX阻断。5. 灌注包含我的细胞与ACSFμM TTX + 10毫米茶。重复步骤3，以显示外部持续的波达斯sium电流减少(见注10)。

3 (a)由50 ms long10 mV测试脉冲引起的平均电流轨迹。虚线表示Iseries和Iinput。(b)斜坡诱导AP的电压轨迹。说明了AP阈值、振幅、峰值、AHP和1 / 2 AP振幅宽度的测量。© 200 ms长电压步长引起的电流痕迹。快速向内的钠电流用箭头表示。虚线表示向外持续的钾电流。(d)谷氨酸能sPSC和氨基丁酸能sPSC的电流痕迹的例子。(e)由50 ms长10 mV大电压步长170 ~ +10 mV引起的电流痕迹。虚线表示测量的电流(左)。图中显示了电流-电压关系(右)
多巴胺去神经化纹状体神经元的电生理：
成年蜜蜂脑神经细胞电生理特征：

低水平铅暴露对大鼠海马CA1区锥体神经元动作电位激发的兴奋作用
电极内液：130 mM potassium gluconate, 10 mM HEPES, 2 mM MgCl2, 0.1 lM CaCl2, 2.54 mM ATP disodium, pH 7.25k, at room temperature (adjusted with KOH).

最后

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